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典型应用

细胞铺板实验操作技巧
阅读次数:41 发布时间:2019/11/27 9:04:56

    做细胞生物学实验,细胞铺板大概是常见的一个实验。但是有很多人不是很得要领,铺得不是很均匀:要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶。怎么办呢?以下来自丰寿技术人员详细解析,请收好了!

   一般96孔板,每孔是加100微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入,加完半边板后,将未加的细胞悬液混一下再继续加剩余的半边板子,都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不好),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。

   6孔板、12孔板或24孔板,均可采用将个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔一次类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时候可以避免加在中间,中间细胞多,而加在周边晃匀后会出现周边细胞多中间少的现象,细胞分散较均匀,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。

   细胞悬液加完后,将细胞培养板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。然后从底部敲击,使之分散。如果实验室有平板振荡器的话,建议用这个仪器稍振荡一下,效果不错,振幅小,频率高。

   细胞要尽量打散,大部分呈单个状态。离心后,要充分悬浮。还有转移到六孔板后,需要晃动,晃的时候zui好不要让细胞液转圈,不然细胞就全被带到中间去了,就会不均匀。
 
   一瓶细胞长满后,正常处理,在培养瓶里吹匀,然后铺6孔板,每孔2毫升,铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭,然后放到培养箱里,轻微的左右前后各三圈。基本上24小时之后再观察,每孔的细胞都会很均匀。

   计算好所需要的全部液体量和细胞量,混匀后,加到六孔板里,六孔板按横8字型晃,显微镜下观察,如果不均匀,按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话,在种六孔板的过程中,随时晃一下混匀用的瓶子。

   放在水平板面上先上下移动,再左右移动,每个方向5到6次,但关键的是摇晃后zui好直接放入培养箱中,不要再做过多的运动,例如放到镜下去看,否则很容易就又聚到中间去了。
 

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