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技术文章

植物安排样本的前处理

点击次数:475   发布时间:2019/10/31 8:55:18

    一、匀浆介质 
 
    一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定目标的情况自行设定浓度,意图是坚持样本的等渗环境。 
 
    二、安排匀浆的制备 
 
    1、取安排块(0.2g~0.5g)可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,滤纸拭干,精确称重,放入5ml的匀浆管中。 
 
    2、按重量(g):体积(ml)=1:4的比例参加4倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎安排块。 
 
    3、匀浆的方式:手艺匀浆,机器匀浆。 
 
    ① 手艺匀浆:左手持匀浆管将下端刺进盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直刺进套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充沛研碎,制成20%的匀浆液。 
 
    ② 机器匀浆:用安排捣碎机10000~15000 转/分 上下研磨制成20%安排匀浆,也可用内切式安排匀浆机制备(匀浆时刻10秒/次,间隙30秒,接连3~5次,在冰水中进行,可适当延伸匀浆时刻),
 
    4、将制备好的20%匀浆液用一般离心机或低温低速离心机4000转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定. 
 
    三、样本保存: 
 
    植物安排样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中心如不重复冻融,-20℃以下可保存三个月,-70℃以下可保存六个月。 制备好的匀浆液建议不要冻存,当天进行测定,如放置时刻过长相关酶活会有所下降,部分目标4℃可寄存3~5天(如SOD要寄存2~3天,MDA可寄存3~5,总蛋白测定可存5~7天。

原创作者:上海elisa生物技术有限公司

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