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阅读次数:683 发布时间:2013/5/20 10:10:32
ELISA试剂盒质量保证是一个复杂的过程,许多重要的环节都影响到检测的
质量:
一、方法学的影响
ELISA测定模式包括以下几种:双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、
IgM抗体捕捉法、竞争抑制法,其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)
因受操作时差所引起的不公平竞争等因素的影响,结果重复性较差,质
量较难控制。
二、试剂因素
不 同批次的ELISA试剂在制作过程中很难保证质量完全一致,即使是通
过批批检的项目其检测结果也存在差异,因此必须选择和订购长批号的
试剂,并保证保存条 件。严格执行这一标准可以避免因试剂批号改变而
重新建立质控体系及重新评估试剂的复杂过程,并且能够保证结果的稳
定性;对于效期短、使用率低的试剂,应当 小量分装,每次使用则取分
装部分即可,避免反复冻融造成试剂的失效。
1、避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水
冲洗。
2、实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3、不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
三、样本因素
标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素,前者包括类风湿
因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体、溶菌酶等,后者包括标本溶血、
标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复
冻融等。
将 抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。换言之,包被即是抗
原或抗体结合到固相载体表面的过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通
过物理吸附结合 的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表
面的疏水基团间的作用于。这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分
子量、等电点、浓度等的影响。载体对 不同蛋白质的吸附能力是不相同
的,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸
附到固相载体表面。IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附 力,其联结
多发生在Fc段上,抗体结合点暴露于外,因此抗体的包被一般均采用直
接吸附法。蛋白质抗原大多也可采用与抗体相似的方法包被。
不易吸附 在聚苯乙烯载体上的非蛋白质抗原可采用特殊的包被方式。例
如,在检测抗DNA抗体时,需用DNA作为包被抗原,而普遍的固相载体一
般不能直接与核酸结合。 可将聚苯乙烯板先经紫外线照射(例如30W紫
外灯,75cm照射12小时),以增加其吸附性能。固相载体先用碱性蛋白
质,如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包 被,也可提高核酸的结合力。也可
用亲和素生物素系统作间接包被,即用亲和素先包被载体,然后加入生
物素化的DNA,这种包被方法均匀、牢固,已扩大应用于 各种抗原物质
的定量测定。