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阅读次数:796 发布时间:2012/11/7 9:19:27
(一)生物标本采集
1.血液采集 终末和非终末采血技术(如麻醉,取血体积)是有区别的,在以动物死亡为实验结束(终末实验)时的情况下采血与在清醒动物身上单次或多次采血的情况是迥然不同的.
在实验过程中减少动物的疼痛与不安和获得预期实验结果一样重要.这不仅是出于人道主义,而且也是良好科学实践所要求的内容.因某一特定采血技术的动用和由此给动物带来的不安可能会使动物产生应激,而伴随应激反应出现的许多生化和生理改变会影响实验结果,如血中儿茶酚胺类、催乳素和糖皮质激素的升高会影响葡萄糖、红细胞数、白细胞数和细胞压积等一些代谢参数.所以如果不能完全排除应激,那么也应将应激降至*小程度.这不只是为动物考虑,也是为获得有代表性数据的良好科学实验所需.
在非终末采血中;不要抽血太多,因为取血过多会减少总血量而导致错误结果.总血量的减少会伴随血红蛋白含量、氧转运能力和血压的下降及应激相关激素浓度的升高,也可能进一步产生其他变化,如胃粘膜坏死等.
血液总量取决于物种、性别、年龄、健康及营养状况.对于同一种物种,较大动物单位体重的总血量比较小的动物要少,老龄和肥胖动物比年轻和正常体重的动物单位体重含总血量少.一般情况下,总循环血量为55~77mI/kg体重.
非终末采血可分为单次和多次采血,单次采血量低于动物总血量的15%,对动物不会有影响.然而,若取量为总血量的15%~20%,则会出现一些副作用,如心排血量或血压降低.如果取总血量的30%一40%则会引起缺血性休克,若取血达40%可引起约50%的猪和大鼠死亡.
康的没有明显不良反应的动物,单次采血不超过动物总血量的15%,可在3—4周居重复采血.多次采血每24h不应超过总血量的1%[o.6 mi/(kg,d)],若采集次数和(或)采血量过多则引起贫血.
对大、小鼠采取不超过o.1ml的毛细管中血液常用尾尖果血法.眼眶静脉丛穿刺通常适用于无尾动物如仓鼠.当尾静脉不能满足较大的采血量时,大/小鼠也可用此技术.一般要求在麻醉下操作.只有当没有别的方法的特殊情况下,2周后才能考虑用动物恢复的眼眶静脉丛再次取血.这项技术应由训练良好的工作人员来操作,而且只能用动物的一只眼睛.不赞成在无麻醉条件下,用眼球摘除法取血.
在毒物动力学研究中,大鼠采血可采用;尾静脉、趾脉管系、全麻下心脏穿刺、全麻下外颈静脉和总颈动脉插管.
兔和豚鼠可用耳绕静脉、颈静脉或隐静脉.较大动物的采血可从浅表静脉进行(隐静脉、头静脉、颈静脉).
2.尿液采集 大鼠和小鼠可用代谢笼,下部有粪尿分离铝.在毒物动力学研究中,对半减期长(数小时以上)的受试化学物可用代谢笼,对半减期短的受试化学物可在全麻下经尿道或经腹壁插管至膀胱收集尿液.对犬可用接尿法或导尿法.
3.胆汁采集 在毒物动力学研究中,可直接插管至总胆管,其尖端应接近肝门区的分叉点.大鼠胆汁一般达0.5-1.0ml.插管后应立即给以受试化学物,因为胆盐不能再循环时,胆汁的成分就会改变.对有胆囊的实验动物(如豚鼠和兔),应在胆囊基底部结扎胆囊,以防止胆囊延缓经胆汁消除.
4.粪便采集 大鼠和小鼠可用代谢笼,下部有粪尿分离器粪,分析前剃去表层,取内层粪分析.