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阅读次数:318 发布时间:2022/5/10 10:12:05
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由于疫情原因,劲马生物全体员工已居家办公一个多月了,我们也竭尽所能,希望提供给客户更好的服务体验。为了提高员工的业技能,公司邀请了实验室技术部的周博士给大家讲解培训ELISA实验的注意事项和难点,此次培训全程采取线上的方式,以下是此次培训重点内容。
一、ELISA实验原理:
ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型,出现颜色反应。所以,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应,颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定,这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来,使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。
二、ELISA实验疑难问题解答
1.非正常的样本值
①不正确的收集或保存
解决方案:确保正确的底物体积混合。如果底物是冻干粉,用相应缓冲液重悬完全,充分混合并在一定时间内使用。
②不正确的样本制备
说明书中样本制备方法已经过性能测试验证,严格按照说明书推荐进行。确保使用正确的校正稀释液。
2.信号强度增长不充分
①底物准备有误
解决方案:确保正确的底物体积并混合。如果底物是冻干粉,用相应缓冲液重悬完全,充分混合并在一定时间内使用。
②每孔底物添加体积有误
解决方案:保证移液器正常工作,必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。
③孵育时间或温度有误
解决方案:严格按照推荐的孵育时间和温度进行实验,避免在环境条件变化的位置孵育96孔板(如放在通风处或窗台边)。
④偶联物或底物准备有误
解决方案:确保混合相同体积的偶联物和底物。加入后会立即显色。底物在使用应避光保存。
⑤仪器设置不正确
解决方案:确保酶标仪使用了正确的滤光片,确保按照说明书,正确的配置仪器参数。
3.边缘效应
①工作台温度不均衡
解决方案:避免在环境条件变化的位置孵育,如放在通风处或窗台边。
②体系液体蒸发
解决方案:保证移液器正常工作,必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。
③叠板
孵育时避免叠板。
4.重复性较差,经常有客户反馈说做了两个复孔值相差太大。
①样品数量多少不一,加样时间有长有短
解决方案:重复某一样品时,加样时间尽可能与次接近。
②保温时间不一致,洗涤条件不一致,操作人员不一致
解决方案:重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性。
③加样量不一致
解决方案:样品稀释应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。
劲马生物elisa试剂盒优势:
1.全面 混合8种不同的常见抗原,对自身免疫性疾病进行全面筛查。
2.快速 检测时间短(~2小时),确诊时间更早。
3.准确 ELISA检测方法,灵敏度高,特异性强,适用性好。
4.质优 美国技术开发,高品质及高可靠性的分析性能。
5.价低 国内自生产,符合国内行情,降低生产成本。