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ELISA试剂盒试验前做好对照很首要

阅读次数：431 发布时间：2019/3/27 10:53:02

elisa试剂盒试验固相载体的选择：很多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。
包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，恳求纯度要好,吸附时通常恳求PH在9.0～9.6之间。
吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,通常多选用4℃ 18～24小时。
有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应留心防护。
其方法可所以凹孔平板、试管、珠粒等。
如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
不管何种载体，在运用前均可进行选择：用等量抗原包被，在同一试验条件下进行反应，查询其显色反应是不是均一性，据此判明其吸附功能是不是出色。
正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证试验作用的精确性。

ELISA试剂盒试验条件的选择
在ELISA中，进行各项试验条件的选择是很首要的，其间包括:
有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是如今较为满意的供氢体。
底物作用一段时间后，应参与强酸或强碱以中止反应。
通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。
底物运用液有必要新鲜制造，尤其是H2O2在临用前参与。
然后再固定其它条件或采纳“方阵法”（包被物、待检样品的参看品及酶符号抗体分别为不一样的稀释度）在正式试验系统里精确地滴定其工作浓度。
有时本底较高，说明有非特异性反应，可选用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择恳求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。
蛋白质包被的*适浓度需进行滴定：即用不一样的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相一起，查询阳性标本的OD值。
选择OD值而蛋白量*少的浓度。关于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。

ELISA试剂盒试验酶符号抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定（见酶符号抗体部份）。