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劲马生物为您解析细胞的裂解方法

点击次数：246 发布时间：2022/4/26 10:14:28

在实验中，不同的细胞采用不同的裂解方法。如研磨，细胞匀浆，TritonX－－100，稀减法等等。那么，具体该怎样选择细胞的裂解方法？本节内容主要围绕组织样本裂解细胞的方法做详细介绍。具体操作方法流程如下，也欢迎广大新老客户提供宝贵建议参与我司探讨交流。

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用数分钟内加入PMSF，使PMSF的终浓度为1mM。

3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

原创作者：上海elisa生物技术有限公司