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点击次数：10 发布时间：2024/8/12 9:32:35
WB实验技术交流我们通过裂解细胞，组织等步骤已经把蛋白提取出来，但提出来后要怎么知道提出的效果怎么样，怎么才能在同等量上上样。这就需要进行蛋白定量，目前用得*多的定量方法有两种，一种是BCA法，一种是Bradford 法。下面我们详细介绍下这两种定量方法的原理与优缺点：
一、BCA法：
BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法。其原理是在碱性环境下 蛋白质分子中的肽链结构能与 Cu2+络合生成络合物，同时将 Cu2+还原成 Cu+。BCA 试剂可敏感特异地与 Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物。在 562nm 处有高的光。吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。使用本试剂盒检测灵敏度高，对不同种类蛋白质检测变异系数小，操作简单。
优点：
1.准确：变异系数远小于考马斯亮蓝染色法(bradford 法)
2.线性范围宽，检测灵敏，检测范围：20-2000 μg/ml
3.与金属离子、还原剂和螯合剂、去污剂兼容性好
4.质量检测标准曲线线性关系 R2 值一般为 0.998
缺点：
与 Bradford 法相比不能迅速检测，需要 37℃孵育 30 min。
二、Bradford法：
Bradford法是*简单和快速的比色蛋白定量方法。这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在 465-595 nm 处有的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测 595 nm 的光吸收值的大小计算蛋白的含量。
优点：
1. 与 BCA 法相比，使用本产品反应迅速，即加即检
2. 灵敏度范围为 100-1500 μg/ml
3. 质量检测标准曲线线性关系 R2 值一般 0.980
缺点：
1. 与金属离子、还原剂和螯合剂、去污剂兼容性差
2. 精确度没有BCA法高
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原创作者：上海elisa生物技术有限公司