在实际使用酶联免疫法检测时要首先确定临界值。通过检测结果与临界值的比较，可判定样品为阴性或可疑。对于禁用药物，检测方法的临界值为定量限，即现有的公认的仪器检测所能达到的定量限。对于有残留限量(MRL)的药物，检测方法的临界值为20份添加MRL浓度的样品重复3次测定的均值减去1．64倍标准差。检测结果如小于临界值为阴性，大于或等于临界值或标准规定为可疑，需要用确证法确证。

2.检测限的测定可添加MRL和MRL上下各一个浓度。

每个试验室在使用酶联免疫法检测时，应做一下各自试验室的检测限。检测限为20份空白样品测定的均值加3倍标准差。如果经规范操作后所得检测限大于临界值时，说明试剂盒背景干扰大，试剂盒灵敏度不能满足检测要求，应与试剂盒厂家联系或弃去不用选用另外的试剂盒。

3.酶联免疫检测方法验证

在使用酶联免疫法检测样品时，应对方法进行验证。主要测定以下内容：

①标准曲线的测定，标准曲线至少由5个浓度组成，测定次数不少于5次，以确定工作浓度范围和IC50范围。一般临界值为IC50附近，检测灵敏度高。

②样品检测限的测定。

③样品添加回收实验。对禁用药物可添加定量限和2倍定量限，对于有残留限量(MRL)的药物，可添加MRL和MRL上下各一个浓度。

准确度：若回收率大于40％符合相应检测标准的要求。精密度：批内变异系数每批平行样之间的变异系数小于或等于25％，对于禁用药物小于或等于30％。批间变异系数所有样品间变异系数小于或等于30％，对于禁用药物小于或等于40％。满足以上准确度和精密度要求，说明酶联免疫方法可行，可用来检测药物残留。

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