ELISA实验常用于检测和定量复杂混合物中的特定蛋白质。结果出来后，就需要一定的方法来评估数据是否可靠。主要从以下几个方面进行评估：检测内精度，稀释线性度，回收率，灵敏度（检测限）等。
检测内精度检测内精度：
一般是检测孔板间的重复性。一般用变异系数CV值来评估，变异系数(CV)为标准差σ与平均数µ的比值。每个样品的 %CV 通常应小于 10%，%CV越大代表孔间差异大，重复性不好，结果不可信。CV较大可由以下原因引起: 移液不准确；在使用确保枪头在移液器上套牢，确保吸取正确的液体量；试剂溅入其他孔中；样本或试剂受细菌或真菌污染；试剂间交叉污染；酶标板各处温度不一致，确保酶标板在远离气流的恒温环境中孵育；部分孔干透，确保酶标板在孵育过程中始终处于被封盖状态。
稀释线性度稀释线性度：
稀释线性度是指不同稀释水平下测试样品的结果精度。不同稀释倍数下的测量值与值的比值应该在70%-130%之间。在没有基质干扰时，无论如何稀释，测量值都和真实值吻合。而有基质干扰时，样品稀释会导致基质被稀释，会造成非特异性结合比例的减少，测量值也会随稀释倍数的改变而改变。
回收率：
回收率用于确定目标物质检测是否受样品基质差异的影响。例如，待测上清液中所含的大量蛋白质可能会阻碍抗体结合，提高信噪比，从而导致目标物质检测的浓度低于实际值。通过将已知浓度的目标物质加入到不同的样品基质中来确定回收率。如果平均回收率为 80%-120%，则认为样品基质对检测准确定量分析物的能力影响小。回收率=用基质稀释的目标物质的检测值/用基质稀释的目标物质的确定值*100%。回收率过高或是过低，则提示实验体系受到较大的复杂基质干扰。比如在空白血清中掺入了 1000 pg/mL 的 IL-2，回收率只有 50%，提示血清中有干扰因素影响了抗体与 IL-2 分子的结合。
灵敏度（检测限）：
灵敏度指可与背景区分的分析物水平，通常称为分析灵敏度或检测限。一般有三个指标，分别为LOB，LOD，LOQ。LOB(Limit of blank), 就是我们通常讲的空白检测限。LOB指的是用空白样本去测试，在一定的概率下能测得的测量结果。LOD(Limit of detection), 就是我们通常讲的检测限，就不是用空白样本去检测了，是对低浓度的分析物样本进行测试，在一定的概率的条件下能测得的值。LOQ(Limit of quantitation), 就是我们通常讲的定量限，这个也是用低浓度的分析物样本进行测试得出的较低的值，这个值的准确性是有要求的，就是不光要能测到，而且还要确保结果是准确的。
原创作者：上海elisa生物技术有限公司
