ELISA实验中常见的问题您知道吗？如果您是新手小白，恭喜您看到这篇文章，这篇ELISA实验干货请您收好了！
一、剩余的试剂盒材料要妥善保存
标准品分装后按说明书要求的温度保存，这样可以避免污染，对要求冷冻保存的标准品还可以避免反复冻融；酶标板放回锡箔纸袋，加入干燥剂，封紧封口，4℃保存。忌未将酶标板衡至室温，就放回锡箔纸袋，因为此时由于温度差，酶标板上会有水汽，不利于稳定保存。
二、预实验：通常预实验包括全部标准曲线和小量样本。
预实验有两个主要目的，一来是熟悉实验流程，发现可能忽略的问题；二来是测试样本和试剂盒是否匹配，一旦出现不匹配的情况，不至于浪费过多样本。另外是对样品中目的分析物的丰度作一下大致了解，以确定合适稀释度。
三、加样要快速准确，避免气泡
加样时间宜控制在 15 分钟内。加样要将样本混匀，特别是冻存后融化的样本（自然融化的血清等样本会有分层现象），应上下颠倒充分混匀，注意动作轻缓，避免产生气泡。如冻存融化后的样本有沉淀，可以再次离心。整个加样过程都要注意避免产生气泡。气泡会影响蛋白的相互结合，而影响反应进行。
四、孵育时要让温度均匀，防止挥发变干
孵育时压紧封口膜。多块板一起实验时，要平放各板，不要叠放，以免因温度不均造成漂移或边缘效应。
五、手动洗板的操作指南
加洗液要快速，没有多道移液器可以使用洗瓶。洗液应新鲜配制，以免被其他试剂污染，或染菌。加好洗液后浸泡 30s-1min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水纸上拍板，选用无粉尘和碎屑的吸水纸。需要用力拍板，使孔内没有可见液体挂壁；但也不能太重，不能让样品干太久。酶标板拍干后立即做后续的加液。
六、显色反应的关键点
ELISA试剂盒实验是个酶促底物显色反应，随时间增加，显色变深，所以选择时间终止反应是得到准确的标准曲线和样本浓度的重要因素。终止过程要完善。使用的 TMB 底物时终止点是黄色，不会有任何程度的蓝色或绿色，终止过程中必要时可以震荡96孔板，或用枪头抽吸混匀（终止液含强酸，避免腐蚀）。
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原创作者：上海elisa生物技术有限公司
