细胞受到细菌污染后，培养基会变得浑浊，算是比较容易发现和辨别的污染类型。也有的培养液肉眼观察没有太大差别，但是在显微镜下能观察到细胞的形态有变化，镜下会有小黑点且有规律的运动（黑胶虫）。引起细菌污染的原因一般是实验过程中操作不当，常见的细菌污染有枯草杆菌和大肠杆菌。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，变圆脱落死亡。

2、真菌污染

常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、白色念珠菌和酵母菌。真菌污染时细胞培养液一般不会变浑浊，但在显微镜下可以观察到各种形状的菌丝。真菌污染后，细胞生长变慢，由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。真菌生长的比较慢，不那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

3、支原体污染

在细胞培养过程中，支原体污染发生率高达63%，但细胞被支原体污染时，其生长率一般不会发生显著的影响，所以支原体污染与细菌、真菌污染相比较更难以察觉。当你发现你的细胞形态发生改变、细胞状态变差的时候就要小心一点了，你的细胞很可能被支原体“玷污”了，除此之外，细胞膜周围和细胞间隙之间会出现很多不动的小黑点，当你看到这些小黑点的时候，基本上就可以“确诊”了。

二、应对方法

1. 判断污染源：一旦发现细胞有污染的迹象或已污染，立即判断可能的污染源：有无操作不当？培养基、胰酶、PBS等颜色、澄清度是否正常？

2. 及时处理：若确定现有的培养基、胰酶、PBS可用，则继续使用；若无法确定则新配培养基、PBS、胰酶，原有的液体在确定是否污染后再做处理。

3.若为霉菌污染，在以PBS润洗2~3遍后换液，无需加入高浓度双抗。培养48h后污染未再次出现即可。

4.若为真菌污染，在PBS润洗、换液后可加入两性霉素B（两性霉素B有细胞毒性，不推荐使用），也可加入300μg/mL氟康唑培养，污染控制后改用150μg/mL培养2~3代3 若怀疑支原体污染，则可进行PCR检测或直接使用支原体清除试剂。也可购买环丙沙星注射液，于超净台内打开直接添加到培养基中，以20μg/mL浓度2代后改用10μg/mL浓度持续培养约2周。

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