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点击次数：654 发布时间：2019/11/4 9:44:58
胰蛋白酶为蛋白质水解酶，作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。胰蛋白酶工作部位在小肠,此处为碱性环境,PH为8左右这决定了胰蛋白酶*适ph值为8。胰蛋白酶能够催化蛋白质的特定肽键水解，这个催化过程是不需要能量的，不会使酶失去活力，也不会改变形状和使自身水解。不同的蛋白酶可以作用在不同氨基酸相连组成的肽键，因此胰蛋白酶并不能作用在所有的肽键。
胰蛋白酶配制方法：
1.称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为 0.25 %，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调 PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中。搅拌混匀，置于 4℃ 内过夜。
2.用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（ 0.22 微米微孔滤膜）抽滤除菌。
3.分装成小瓶于 -20℃ 保存以备使用可！
胰蛋白酶原的激活：
将胰蛋白酶原粗品称重（湿重），分次加入10倍体积预冷的蒸馏水水（按滤饼重量计算），使滤饼完全溶解（一般情况滤饼中硫酸铵含量约占饼重1/4）。用5mol/L NaOH将溶液调至pH8.0，慢慢地搅拌下加入固体无水CaCl2使溶液的Ca2+终浓度达到0.1mol/L（要减去一部分氯化钙与硫酸铵结合生成硫酸钙的钙离子）。取出2mL溶液用于测定激活前的蛋白含量及酶活性。原溶液中加入5mg结晶胰蛋白酶，轻轻搅拌均匀，25℃放置2～4h，或4℃放置12～16h，使胰蛋白酶原活化。每隔1h取样测定胰蛋白酶活性增长情况，直至酶激活速度变慢或停止增长。一般比活可达到3 500～4 000 BAEE单位/mg。留取2mL溶液用于测定激活后的蛋白质含量和酶活性。激活酶溶液用2mol/L硫酸调pH至 2.5～3.0，滤纸过滤，滤去硫酸钙沉淀，收集滤液，4℃保存备用。
原创作者：上海elisa生物技术有限公司