［摘 要］ 目的：观察氟伐他汀（fluvastatin，Flu）对高糖腹透液（high-glucose peritoneal dialysate，HGPDS）诱导的人腹膜间皮细胞
（human peritoneal mesothelial cells，HPMCs）分泌血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的影响。 方法：体外培养 HPMCs，同步化 48 h 后，分组如下：正常对照组、HGPDS 组、HGPDS＋Flu 组、单纯 Flu 组。 倒置显微镜观察各组细胞形态， RT-PCR 法检测各组 VEGF 的 mRNA 表达，Western blot 检测各组 VEGF 蛋白的表达。 结果：与正常对照组相比，在 HGPDS 作用下，48 h 后细胞由铺路石样转变为长梭形，1 × 10－6 mol ／ L Flu 可部分逆转 HPMCs 的形态改变。 与正常对照组相比， 在 HGPDS作用下，人腹膜间皮细胞 VEGF mRNA 及蛋白表达明显增多（P ＜ 0．05），并呈时间依赖性，VEGF mRNA 和蛋白分别在 HGPDS干预后 12 h 和 48 h 达高峰（P ＜ 0．05）。 Flu 可明显抑制 HGPDS 诱导的 VEGF 的表达（P ＜ 0．05），并呈浓度依赖性。 结论：适当浓度的 Flu 可以抑制 HGPDS 刺激体外培养人腹膜间皮细胞 VEGF 表达增加。
［关键词］ 氟伐他汀；高糖腹透液；人腹膜间皮细胞；血管内皮生长因子
［中图分类号］ R392．12 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007-4368（2013）06-754-05
doi：10．7655 ／ NYDXBNS20130608


The effect of high-glucose peritoneal dialysate ａnd fluvastatin on the expression of vascular endothelial growth factor in human peritoneal mesothelial cells
Wu Xia，Liu Jia*，Liu Yanchun，Xu Yaguang，Zhao Xiufen，Qian Jun，Xing Changying
（Departmentof Nephrology，the First Affiliated Hospital of NJMU，Nanjing 210029，China）

［Abstract］ Objective：To explore the effect of high-glucose peritoneal dialysate （HGPDS） ａnd fluvastatin （Flu） on the expression of vascular endothelial growth factor （VEGF） in human peritoneal mesothelial cells （HPMCs）． Methods：After incubated in DMEM with 0．01％ FBS for 48 h， HPMCs were randomly divided as follows：control group， HGPDS group， HGPDS＋Flu group， Flu alone group． The phenotype changes of HPMCs were observed by light microscopy． The mRNA expression of VEGF was observed by RT- PCR． HPMCs were treated for 48 h ａnd the levels of VEGF protein were measured by Western blot． Results：Compared with the normal control group， after incubation with HGPDS for 48 h， the cell morphology was changed from a typical cobblestone-like appearance to fibroblast-like appearance． Flu （1 × 10－6） mol ／ L could partially improved the cell morphology changed by HGPDS． The mRNA ａnd protein expressions of VEGF increased time dependently in HPMCs treated with HGPDS （P ＜ 0．05）， which peaked at 12 h ａnd 48 h， respectively． Flu significantly inhibited the effects of HGPDS on the expression of VEGF in a dose-dependent manner（P
＜ 0．05）． Conclusion： Flu could decrease VEGF expression in HPMCs which was induced by HGPDS．
［Key words］ fluvastatin；high glucose peritoneal dialysate；human peritoneal mesothelial cells；vascular endothelial growth factor
［Acta Univ Med Nanjing，2013，33（6）：754-758］





腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）已经成为终末期肾脏病（end stagerenal disease，ESRD）的主要替代


［基金项目］ 国家自然科学基金资助（81170660）；江苏省科技厅基础研究计划（自然科学基金）（ BK2011849）；江苏省卫生厅科研基金资助（H200317）
*通信作者（Corresponding author），E-mail：jiajj3＠sina．com


治疗。长期的腹膜透析将导致腹膜功能的衰竭， 腹膜功能的保护是腹膜透析面临的问题。 腹膜表面的间皮细胞能够分泌多种物质， 在长期的腹膜透析过程中， 会通过分泌转化生长因子－β（trans- forming growth factor-β，TGF-β）、血管内皮生长因子
（vascular endothelial growth factor，VEGF） 等增加来

第 33 卷第 6 期
2013 年 6 月


武 侠等：高糖腹透液对腹膜间皮细胞分泌 VEGF 的影响及氟伐他汀的干预作用


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改变腹膜的功能［1－3］。 现在用的腹膜透析液多为非生物相容性的，葡萄糖透析液就为*常用的一种，葡萄糖透析液由于含有多种葡萄糖降解产物（GDP），这些物质会改变腹膜正常结构，使间皮下基质增多，血管增生，通透性增加，*终可能发展为超滤衰竭［4］。有报道 VEGF 在腹膜的通透性增加及血管增生方面发挥重要作用［5］。 本研究旨在探讨高糖腹透液（high- glucose peritoneal dialysate，HGPDS） 对人腹膜间皮细胞 （human peritoneal mesothelial cells，HPMCs）分泌 VEGF 的作用及氟伐他汀对腹膜间皮细胞的保护作用，此类作用尚未见文献报道。
1材料和方法
1.1材料
人腹膜间皮细胞株（HMrSV5，上海劲马生物科技有限公司）；氟伐他汀（fluvastatin，Flu，粉剂，北京诺华公司馈赠）；DMEM 培养基（粉剂）、青链霉素和胎牛血清（Gibco 公司， 美国）；4．25％ 葡萄糖腹膜透析液（Baxter 公司， 美国）；TRIZOL、RT-PCR 试剂盒
（TaKaRa 公司， 日本）； 兔抗人 VEGF 多克隆抗体
（Abcam 公司，美国）；鼠抗人 GAPDH 单克隆抗体（武汉博士德公司）。
1.2方法
1.2.1细胞培养
HMrSV5 细胞在 37℃、5％CO2 的培养箱内生长， 所用完全培养基为 DMEM 培养基（含葡萄糖浓度为
5．5 mmol ／ L）添加 10％胎牛血清、链霉素 100 U ／ L 和

青霉素 100 U ／ L。 2～3 d 换液，待长满后用 0．25％的胰蛋白酶消化传代，用于实验的为第 5～10 代细胞。
1.2.2细胞形态观察
体外培养 HPMCs，同步化 48 h 后，分组如下：正常对照组、HGPDS 组、 单纯 Flu 组、HGPDS＋Flu 组。培养 48 h 后在倒置显微镜下观察细胞形态变化。
1.2.3实验分组
HPMCs 被同步化 48 h 后，分为：①正常对照组
（DMEM 培养基与完全培养基 1∶1 稀释）； ②HGPDS组 （按 1∶1 的比例稀释 4．25％腹膜透析液和 DMEM 完全培养基， 分别刺激 0、6、12、24 h）； ③HGPDS＋ Flu （按 1∶1 的比例稀释 4．25％腹膜透析液和 DMEM 完全培养基， 所加 Flu 浓度为1 × 10－6、1 × 10－7、1 × 10－8 mol ／ L）组；④单纯 Flu（按 1∶1 的比例稀释 DMEM和完全培养基，氟伐他汀浓度为 1 × 10－6 mol ／ L）组，按分组条件均干预细胞 12 h。 干预结束后收集细胞。
1.2.4RT-PCR 检测 VEGFmRNA 表达
用 TRIzol 法提取细胞总 RNA，分光光度计测定浓度后，从总 RNA 中取 1．0 g 进行逆转录获得 cD- NA，反应体系为 10 μl。 取 1 μl cDNA 模板进行 PCR 扩增，该反应体系为 25 μl。GAPDH 作为内参，其特异性引物由上海英俊生物工程有限公司合成
（表 1），扩增结束后后分别取 PCR产物各 8 μl，2．5％琼脂糖凝胶电泳（含 0．6 pg ／ ml 溴化乙锭），紫外灯下观察结果。 图像分析软件进行 PCR 条带灰度扫描， 以 GAPDH 为内参作半定量分析，数值以两者吸光度比值表示。 同一实验重复 3次。
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