ＧＰ７３在肝细胞癌和胆管细胞癌中的表达
邹 凡１ａ，揭小华１ａ，巢映晖１ｂ，傅华群１ｂ，王荣胜２，王开阳１ｃ，昌毓穗１ｄ
（１．南昌大学ａ．临床医学院２０１２级；ｂ．第二附属医院肝胆外科；ｃ．第二附属医院急诊科；
ｄ．附属医院急诊科；２．江西省人民医院ＩＣＵ，南昌３３０００６）
摘要：目的 探讨血清高尔基体糖蛋白７３（Ｇｏｌｇｉｐｒｏｔｅｉｎ－７３；ＧＰ７３）对肝细胞癌及胆管细胞癌的诊断价值；方法采用双抗体夹心酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）定量测定方法，检测６０例肝细胞癌患者（Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）、５０例胆管细胞癌患者（ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＩＣＣ）以及３０例健康献血者血清标本中高尔基体糖蛋白（Ｇｏｌｇｉｇ－
ｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＰ３７）的浓度。结果 血清 ＧＰ３７在 ＨＣＣ 组的表达明显高于ＩＣＣ 组以及健康组（Ｐ＜０．０５）；ＧＰ３７ 在诊断 ＨＣＣ 的敏感度和准确度均要优于 ＡＦＰ（Ｐ＜０．０５），二者特异度的差异无统计学意义；ＧＰ３７ 在诊断 ＨＣＣ 的敏感度、特异度以及准确度均高于诊断ＩＣＣ。结论 ＧＰ３７有可能成为诊断和鉴别诊断 ＨＣＣ 和ＩＣＣ 新的临床肿瘤标
记物。
关键词：高尔基体糖蛋白７３；肝细胞肝癌；胆管细胞癌
中图分类号：Ｒ－３３ 文献标志码：Ａ 文章编号：２０９５－４７２７（２０１７）０１－００１９－０４
ＤＯＩ：１０．１３７６４／ｊ．ｃｎｋｉ．ｎｃｄｍ．２０１７．０１．００５
ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＰ７３ｉｎＨｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒＣａｒｃｉｎｏｍａａｎｄ ＩｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃＣｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ
ＺＯＵＦａｎ１ａ，ＪＩＥＸｉａｏ－ｈｕａ１ａ，ＣＡＯ Ｙｉｎｇ－ｈｕｉ１ｂ，ＦＵ Ｈｕａ－ｑｕｎ１ｂ， ＷＡＮＧ Ｒｏｎｇ－ｓｈｅｎｇ２，ＷＡＮＧ Ｋａｉ－ｙａｎｇ１ｃ，ＣＨＡＮＧ Ｙｕ－ｈｕｉ１ｄ
（ａ．２０１２ＧｒａｄｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ；ｂ．ＥｍｅｒｇｅｎｃｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄ ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ；ｃ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆ ＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ； ｄ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｍｅｒｇｅｎｃｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＮａｎｃｈａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ２．ＩｎｔｅｓｃｖｅＣａｒｅＵｎｉｔ，ＪｉａｎｇｘｉＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＰｅｏｐｌｅ’ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０００６，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｓｅｒｕｍ Ｇｏｌｇｉｐｒｏｔｅｉｎ－７３（ＧＰ７３）ｉｎｔｈｅｄｉａｇｎｏ－ ｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）ａｎｄｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＩＣＣ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｓｅｒ－ ｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆＧＰ７３ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＥＬＩＳＡｉｎ６０ ＨＣＣｐａｔｉｅｎｔｓ，５０ＩＣＣｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄ３０ｈｅａｌｔｈｙ
ｂｌｏｏｄｄｏｎｏｒｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＳｅｒｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆＧＰ７３ｉｎＨＣＣｐａｔｉｅｎｔｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅ ｉｎＩＣＣｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｈｅａｌｔｈｙｓｕｂｊｅｃｔｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ＧＰ３７ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｓｍｏｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｔｈａｎＡＦＰｄｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ ＨＣＣ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒ－ ｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄａｃｃｕｒａｃｙｏｆＧＰ３７ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｎｄｉａｇ－ ｎｏｓｉｎｇ ＨＣＣ ｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｄｉａｇｎｏｓｉｎｇＩＣＣ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＧＰ３７ ｍａｙｂｅａｎｅｗｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｕｍｏｒｍａｒｋｅｒｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＨＣＣａｎｄＩＣＣ．
ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：Ｇｏｌｇｉｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ７３；ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ
原发性肝癌（ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｉｃｃａｎｃｅｒ，ＰＨＣ）在我国是一种常见的恶性肿瘤，发病率有逐年上升趋
势［１］。根据形态学和细胞遗传学对原发性肝癌的定义，原发性肝癌主要分为肝细胞癌、胆管细胞癌患者
收稿日期：２０１６－０９－２０
基金项目：江西省卫生计生委科技计划（２０１５５２８９）
通信作者：王开阳，男，主治医师，Ｅ－ｍａｉｌ：ｋａｉｙａｎｇ３９３７＠１２６．ｃｏｍ。
（ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＩＣＣ）和 混合癌［２］。肝细胞癌和胆管细胞癌是*常见的恶性肿瘤，且进展快、恶性程度高、预后差以及侵袭性强［３－４］。甲胎蛋白（ａｌｐｈａｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＦＰ）是一种广泛应用于临床诊断原发性肝癌的传统血清标志物。但大量的研究和临床经验发现，ＡＦＰ 对 ＰＨＣ 的诊断价值仍具有一定的局限性：１）敏感度为４０％ ～６５％，特异度为 ７６％～９６％；２）对早期的发现更差，约３０％ 的 ＨＣＣ患者 ＡＦＰ 阴性；３）对于ＩＣＣ 没有诊断价值［５－８］。因此，为进一步提高对原发性肝癌诊断的准确率和早 期诊断水平，寻找一种更高灵敏度和特异度的血清标志物的研究成为一大热点［９］。
已有研究发现 Ｐ７３ 与 ＰＨＣ 密切相关，且有望成为诊断肝癌更好的、更早期的血清标志物。然而， 对于 ＧＰ７３在不同细胞型肝癌患者中的表达是否存在差异未见有研究。为此本研究，以 ＨＣＣ 患者、ＩＣＣ 患者和健康人群的血清为研究对象，通过双抗体夹心 ＥＬＩＳＡ 法定量测定 ＡＦＰ 和 ＧＰ７３ 的浓度，并分析和比较 ＧＰ７３ 和 ＡＦＰ 在 ＨＣＣ 组、ＩＣＣ 组和健康对照组中敏感度、特异度以及准确度的关系。为探索 ＧＰ７３对肝细胞癌和胆管细胞癌的鉴别和诊断提供理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 实验标本
收集２０１５年７月至２０１６年３月南昌大学第二附属医院、附属医院以及江西省人民医院手术治疗且具有完整临床信息的６０ 例 ＨＣＣ 患者（ＨＣＣ组）、５０例ＩＣＣ 患者（ＩＣＣ 组）和３０ 例健康献血者的血清标本，所有患者均经术后病理检测确诊，并随机挑选入组。依据世界卫生组织 ＴＮＭ 分期，在１１０例肝细胞癌中Ⅰ期２３例，Ⅱ期３８例，Ⅲ期４４例，Ⅳ期５例。在６０ 例 ＨＣＣ 组中有５６ 例有乙肝背景的
患者，占 ＨＣＣ 总例数９３．３％；男３７ 例，女２３ 例，年龄２３～７２岁，平均年龄５６岁。５０例ＩＣＣ 患者中有 ３０例具有乙肝背景，占总例数的６０．０％；男２２ 例，女２８例，年龄４５～６８岁，平均年龄５９ 岁。３０ 例健康人群中男女比例是２１，平均年龄４５ 岁。所有研究对象均对此次研究知情同意。
１．２ 实验方法
１．２．１ 血清标本采集
抽取 ＨＣＣ、ＩＣＣ 患者术前及健康体检人群的静脉血 ２ ｍＬ，经 离心机分离得到血清，并 放置在
－２ ℃ 环境中保存。
１．２．２ ＡＦＰ 与 ＧＰ７３蛋白测定
ＡＦＰ 与 ＧＰ７３ 测定所用试剂盒由上海劲马生物科技有限公司提供，批号分别为 １１０５２９－１ 以及 １１０５１５－３。采用双 抗体夹心 ＥＬＩＳＡ 法检测 ＧＰ３７和 ＡＦＰ 的血清浓度，操作按照公司试剂盒上的说明书进行。吸光度（ＯＤ 值）用上海旦鼎贸易有限公司生产的美国宝特 Ｂｉｏ－Ｔｅｋ 酶标仪在４５０ｎｍ 波长下测定，操作按仪器说明书进行。
１．２．３ 结果测定
采用目前国内外较为通用的结果测定法，即以标准物的浓度为横坐标，相应各点 ＯＤ 值对应的数值为纵坐标制作标准曲线。根据标准物的浓度与ＯＤ 值计算出标准曲线的直线回归方程，将样品的ＯＤ 值代入回归方程中计算出样品浓度，然后乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。根据标准曲线分析得出 ＧＰ７３诊断 ＨＣＣ 和ＩＣＣ *佳截断值分别是 ８７．５ｎｇ·ｍＬ－１和８３．５ｎｇ·ｍＬ－１，ＡＦＰ 诊断 ＨＣＣ和ＩＣＣ 临界参考值是２０ｎｇ·ｍＬ－１。
１．３ 统计学方法
计量资料采用ｘ±ｓ 表示。各组间的比较采用非参数秩和检验以及ｔ 检验，各构成比之间采用卡方检验，应 用单因素或多因素ｌｏｇｉｓｔｉｃｓ 回归分析
ＧＰ７３ 与 ＡＦＰ 各自的效能并确定*佳临界值。以
Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。所有统计分析过程均在ＳＰＳＳ１９．０软件中完成。
２ 结 果
２．１ ＧＰ７３在 ＨＣＣ 组、ＩＣＣ 组和健康组血清中的表达比较
ＧＰ７３在 ＨＣＣ 组、ＩＣＣ 组和健康组血清中的表达水平逐渐降低，平均质量 浓度分别为 （２０３．５± １３６．３）、（１３７．９±１０１．９）和 （５８．２±５２．５）ｎｇ· ｍＬ－１，且 ＨＣＣ 组、ＩＣＣ 组与健康组相比差异具有统
计学意义（Ｐ＜０．０５）；ＨＣＣ 组与ＩＣＣ 组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）
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