在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。
加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。
那么在ELISA中除了包被外，一般需进行45加样。其中“45加样”是什么意思？这里的45加样，应当为45度加样，即加样枪的吸头所在的直线应当与板条所在的直线呈45度角。
正确的加样方法应为45度，吸头贴着孔壁加入，应注意：
（1）角度太小，会使液体残留在孔壁上，导致加样不准确！
（2）吸头应当贴着管壁和液面的交界处！
在ELISA中加样还要注意如下问题：
1. 吸取样品时，加样枪吸头不应黏附多余的液体；加样时不可90度向孔中滴加液体，这样会导致液体残留在吸头上，加样不准确！
2. 不要将吸头伸入孔中，一方面若接触孔底可能压弯吸头，另一方面可能会将孔中的液体吹起来，加样不准确！
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原创作者：上海elisa生物技术有限公司
