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技术文章

培养基实验的这十大重点要求需您关注

点击次数:685   发布时间:2014/11/26 9:00:43

    从培养基产品的选择直到实验结束都有着不同的讲究,掌握了这些之后操作起来会顺手的多。在培养基实验中,这十大重点要求需您关注:
一 各成份的混合和溶化
    培养基所用化学药品均应是化学纯的,使用不锈钢莴加热溶化,可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。待大部分固体成分溶化后,再用较小火力使所有成分完全溶化,迄至煮沸。
二 pH的初步调正
    对这个步骤,操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的*终PH,保证培养基的质量。PH调整后,还应将培养基煮沸数分钟,以利沉淀物的析出。
三 配方的选定
    同一种培养基的配方在不同着作中常会有某些差别。因此,除所用的是标准方法,应严格按其规定进行配制外,一般均应尽量收集有关资料,加以比较核对,再依据自己的使用目的,加以选用,记录其来源。
四 成分的称取
    培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱,一次完成,不要中断。可将配方置于傍侧,每称完一种成分即在配方面军做出记号,并将所需称取的药品一次取齐,置于左侧,每种称取完毕后,即移放于右侧。完全称取完毕后,还应进行一次检查。

五 过滤澄清
    液体培养基必须绝对澄清,琼脂培养基也应透明无显着沉淀,因此,须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法,滤纸应折叠成折扇或漏斗形,以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。
培养基实验灭菌
    一般培养基可采用121℃高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中,如无特殊规定,即可用此法灭菌。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出,冷至55℃-60℃时,摆置成适当斜面,待其自然凝固。
七 质量测试
    每批培养基制备好以后,应仔细检查一遍,如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其*终pH。
    将全部培养基放入36±1℃恒温箱培养放置一个晚上,如发现有菌生长,即弃去。
    用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基,培养24~48小时,如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次,如结果仍同前,则该批培养基即应弃去,不能使用。

八 培养基的保存
    应存放于冷暗处,能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周,倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。
九 分装
    应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵,其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者)。分装时能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时,分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒,以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中,随该批培养基同时灭菌,以为测定该批培养基*终pH之用。
十 制备记录
    每次培养基实验制备均应有记录,包括产品名称,配方及其来源,和各种成份的牌号,*终pH值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等,记录应复制一份,原记录保存备查,复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。

原创作者:上海elisa生物技术有限公司

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