甲状腺过氧化物酶TPO检测方法全新介绍
甲状腺过氧化物酶（thyroidperoxidase，TPO）是甲状腺微粒体（TM）的主要有效抗原活性成分，分子量为84～105kD，基因重组TPO为933个氨基酸的多肽链。鉴于以往使用的粗提TM抗原中混杂有其他抗原成分，在测定自身免疫性甲状腺炎病人血清中抗-TM时，可能出现少数假阳性，为使结果更为可靠，目前国外已将抗-TPO代替抗-TM抗体检测，而且大多数文献已将抗-TM抗体改名为抗-TPO抗体。我国徐荣桂等首先建立了纯化TPO抗原和测定抗-TPO抗体的ELISA方法。其TPO抗原分析与国外文献报告相似。抗-TPO抗体的阳性率在各组疾病中，与抗-TM抗体有一定相关性（r二0．731），且低于抗-TM阳性率，与国外所得的结果也相近（r二0．584—0．835）。故介绍如下。
1．TPO抗原的制备：取单纯性甲状腺肿手术切除物10g，冰冻后切成小块，加40mL0．05mol／L，pH 7．0PBS（含200btmol／LKl）。用组织捣碎机10000r／min破碎2min，再用超声细胞粉碎仪粉碎3rnin。其匀浆经纱布过滤。1 000r／rain离心10min，上清用35 000Xg离心45min（4℃），沉淀物用上述PBS洗3次，将沉淀物再溶于2mLPBS中，然后加20mLl0％去氧胆酸钠和20mL 0．14~／,胰酶，室温作用1h，立即离心10 000 X g 20rain（4℃），过SephadexG-200凝胶柱，同上PBS洗脱。收集主峰蛋白，PBS透析后再用抗人全血清Sevharose4B亲和层析柱吸收，—20cC保存备用。
2．操作步骤 用TPO抗原5Ug／mL（用0．1mmol／LpH9．6碳酸盐缓冲液稀释）100gL包被聚苯乙烯反应板微孔，4℃过夜；洗涤后，加1：10稀释（用含10％小牛血清PBS）的病人血清100r&，同时设阴、阳性对照孔，45℃1h；洗板后加100tzLl：10 000HRP-SPA，45℃，1h；洗板4次后，用OPD底物显色10rain，以2mol／LU2S04终止反应；在酶标仪测492nm吸光度。阳性：P／N值大于或等于2．1。
3．临床意义 甲亢和桥本甲状腺炎患者血清抗-TIAO的阳性率分别为42．2％和77．7％，与国内外文献报道接近。且类风湿性关节炎患者阳性率（3．1％）比国外的检测结果低。目前国内常用TGA及抗-TPO联合检测作为临床诊断和鉴别诊断自身免疫性甲状腺炎的重要依据。
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