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点击次数:2163 发布时间:2012/11/22 10:57:17
常见elisa结果判定方法
elisa实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的C3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
1.定性测定
(1)ELISA试剂盒阳性判定值法(cut-offvalue,CO值):一般为阴性对照的平均A值加一个常数,试剂制备严格标准化,要先计算出阳性对照A值平均数和阴性对照A值平均数。标本A值≥CO值即为阳性。
(2)抑制率法:在竞争抑制法中结果可用抑制率表示。
抑制率(%)=(A阴性对照A-A待测)/阴性对照X100%,一般以抑制率≥50%为阳性试剂盒
2.半定量测定 结果一般以滴度表示。将标本连续稀释后,进行ELISA检测,在阳性临界值以上的稀释度即为该标本的“滴度”。
3.定量测定 即用己知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA试剂盒测定,与待测标本同时进行测定,绘制标准曲线,结果以绝对量或活性单位表示之。
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